哪知议和只是足利义昭的缓兵之计，他盘算着挟三方原胜利之威的武田军很快就能杀到京都解放自己了，在消停了五日之后，他觉得这次武田信玄该来了（另有一说是为了隐瞒信玄的死讯，真田幸隆一直假借信玄的名义给将军回信，让将军耐心些，自己过几日就到），于10月15日再次起兵征讨信长，信长听说足利义昭再叛，真是又好气又好笑，还以为他第二次叛变怎么也要一年，没想到自己刚到岐阜，人家就主动送上门了，于是立刻起兵征讨！18日，连细川藤孝的支持都没得到就敢起兵的将军全面败退，居城二条御所陷落。29日，织田军如秋风扫落叶般地又攻陷了？岛城，把打仗不行跑的倒挺快，躲在里面的足利义昭揪了出来。恚怒无比的织田信长宣布废除了义昭的“征夷大将军”之位，把他流放到河内，当一介平民。许多有名望的人希望信长多加考虑，信长只好让他们再去找义昭，让他表态臣服，可是有骨气的将军大人竟然誓死不从。信长正好顺水推舟，宣布期限已过，现在再求情，自己也不答应了，至此，传了15代历时230多年的室町幕府正式灭亡，天下进入无主时代！